Técnica de Edición de Acidos Nucléicos en la Toxoplasmosis

Tema: Editando el genoma de Toxoplasma gondii por es sistema CRISPR / Cas9
Tipo de Edición: No Aplica
Dirigido hacia: Knocking out del gen de toxoplasma KU80
Dirigido por: sistema CRISPR / CAS9, ARNsg
Organo a tratar: Cerebro, ojos, pulmones.
Vía de administración: mutagénesis química.

Resultados 

a corto plazo: crear grupos de mutantes de diferentes tamaños en el parásito (T. gondii) y tener un contorno optimizado en el enfoque de examen para bibliotecas de pequeña escala.

mediano plazo: disminución en el nivel de expresión de CLAMP y hacer inhibición en una invasión debido a los defectos en formación de placa.

largo plazo: trans-rescate latente de knock-out, líneas de eliminación del factor de virulencia MYR1 del parasito.

Fuente Bibliografica: 

https://www.researchgate.net/profile/Musafer-Alardi/publication/347932497_Article_Review_Editing_genome_of_Toxoplasma_gondii_by_CRISPRCas9_system/links/5fe80c4545851553a0f5be64/Article-Review-Editing-genome-of-Toxoplasma-gondii-by-CRISPR-Cas9-system.pdf

Ejemplo de Terapia con Stem Cells en la Toxoplasmosis

T. gondii indujo la activación del huésped p-AKT, p-ERK1 / 2 y p-p38 MAPK en células ARPE-19 dependiente de la carga de parásitos. La expresión de VEGF disminuyó después del pretratamiento con inhibidores de PI3K, inhibidor de ERK1 / 2 e inhibidor de p38 MAPK.

El agente anti-VEGF bevacizumab o la transfección de ARNip de VEGF inhibió de manera prominente la activación de p-AKT y p-ERK1 / 2,  en células ARPE-19 infectadas con T. gondii, tambien inhibieron la proliferación de taquizoítos de T. gondii en la célula huésped. 

En conjunto, T. gondii induce de manera prominente la producción de VEGF en las células ARPE-19, y las vías de señalización de VEGF y AKT / ERK1 / 2 se regulan mutuamente en las células ARPE-19 infectadas con T. gondii. VEGF y VEGF-R2 controlan la proliferación del parásito en células ARPE-19 infectadas con T. gondii. 

Stem Cells: ARPE-19

Metodo de Obtencion: Cell Signaling Technology Inc, Sigma (St. Louis, MO), Calbiochem (San Diego, CA) y Roche Korea (Diagnostics Korea, Corea).
Via de Administracion: transfección de ARNip de VEGF

Fuente Bibliografica: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7216739/

ADN recombinante artificial en la Toxoplasmosis

Se produjo la proteína recombinante GRA-4 (rGRA-4) como candidato para un kit de diagnóstico de toxoplasmosis utilizando el plásmido PET SUMO.

Las muestras utilizadas fueron ADN de taquizoítos de T. gondii. El GRA-4 amplificado de ADN de T. gondii se clonó en el vector de clonación pET-SUMO. Se secuenció el gen GRA-4, seguido de transformación de plásmido, aislamiento de ADN plasmídico recombinante y expresión de proteína recombinante en células competentes DE3.

Se obtuvo un alineamiento de la secuencia de aminoácidos de GRA-4 del aislado local que se clonó  y mostró una homología del 99,61% con el GRA-4 predicho de T. gondii.

T: Clonación y expresión de la proteína recombinante GRA-4 de Toxoplasma gondii como candidato a kit de diagnóstico de toxoplasmosis.

O: Producir la proteína recombinante GRA-4 de un aislado local de Toxoplasma gondii como candidato para un kit de diagnóstico de toxoplasmosis en Escherichia coli BL21 (DE3)

G: TgPI-1 (rTgPI-1), ROP2 (rROP2) y GRA-4 (rGRA-4)/ 1036 bp

ER: no se usaron

EL: ... no especifica

Vectores: pET-SUMO

Celulas Receptoras: Procariota: cepa de E. coli utilizada fue BL21 (DE3)

MTG: Transformacion bacteriana por choque termico.

MIC: Cultivo, PCR, secuenciacion, ELISA.

Bibliografia:

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33281340/