Técnica de hibridación para la Toxoplasmosis

La tecnología de biosensor de ADN electroquímico desarrollada para la detección voltamétrica de hibridación de ADN selectiva de secuencia relacionada con el Toxoplasma gondii se detecta midiendo la señal de oxidación de guanina que se produjo en presencia de hibridación de ADN. 

La sonda de captura de Toxoplasma gondii se inmovilizó sobre la superficie de la PGE activada mediante absorción en húmedo y se determinó el grado de hibridación en la superficie de PGE entre la sonda y la diana midiendo la señal de guanina observada. Esta plataforma de biosensor de un solo uso se aplicó con éxito para la detección de la hibridación de ADN relacionada con Toxoplasma gondii en amplicones de PCR.

Fuente Bibliografica:

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26717837/

Prueba PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) para la Toxoplasmosis

Dos dianas multicopia (B1 y Rep529) se utilizan comúnmente en los ensayos de PCR de T. gondii, gracias a un primer o cebador que ayude a la prueba a detectar estos genes.

Los límites inferiores de detección para los componentes B1 y Rep529 del ensayo de doble diana se determinaron utilizando diluciones en serie de la cepa Z185 de T. gondii cultivada. El ensayo de doble objetivo se utilizó luego para analizar 148 muestras intraoculares archivadas (132 vítreo, 16 humor acuoso). 

El diseño de doble objetivo puede garantizar la detección de T. gondii cuando hay variación en una de las dos regiones objetivo.

Fuente Bibliográfica:

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30636207/

Alteraciones de la Epigenómica en la Toxoplasmosis

El genoma de T. Gondii está compuesto por 61.6 megabases y 592 cM, constituido en unidades genéticas de 104 kb/cM y 14 cromosomas

Nichols y cols en 1983 reportan antígenos de excreción y secreción de T. gondii localizados en diferentes organelos del taquizoíto de T. gondii como son roptrías, micronemos y gránulos densos donde se almacenan productos altamente inmunogénicos que son secretados intra y extracelularmente por el parásito, donde resalta el estudio de la molécula de Glycosilfosfatoinsoitol (GPI) que juega un papel importante en el anclaje de proteínas de membrana de T. gondii.

Para hablar acerca de la epigenómica debemos ver a esta enfermedad en el momento en que se vuelve congénita y esto se puede dar mediante transmisión intra útero de madre a hijo mediante la placenta, durante el parto o en el tiempo de la lactancia materna.

Fuente Bibliográfica:

https://www.researchgate.net/profile/Ma_Galvan-Ramirez/publication/298214396_Toxoplasmosis_Animal/links/5ab190d4458515ecebece5e3/Toxoplasmosis-Animal.pdf#page=17

Alteración de la Traducción en la Toxoplasmosis

TgCDPK3, que codifica una proteína quinasa dependiente de calcio. Se predice que las cuatro mutaciones alterarán regiones clave de TgCDPK3 y esto se confirma mediante estudios bioquímicos de formas recombinantes de cada una.

La fosfolipasa C dependiente de fosfoinositido (PI-PLC) desencadena la vía de señalización del calcio que desempeña un papel importante en la secreción de gránulos densos y micronemas

en la patogénesis de Toxoplasma gondii (T. gondii).

La edelfosina puede disminuir los antígenos excretores / secretores de T. gondii mediante la inhibición de PI-PLC.

Fuente Bibliografica: 

https://link.springer.com/article/10.1007/s00436-020-06601-x#additional-information

Alteraciones de las Transcripción en la Toxoplasmosis

Luego de dividirse, los taquizoitos darán origen a los quistes tisulares intracelulares que se localizan en múltiples tejidos, pero más comúnmente en tejido nervioso y muscular; estudios en gatos muestran que la lengua es un órgano altamente parasitado incluso en mayor medida que el cerebro, aunque también se han encontrado en ganglios linfáticos y otras visceras  conteniendo a cientos de bradizoítos, que pueden persistir en estos tejidos por largo tiempo.

Una proteína recombinante que abarca el dominio AP2 de TgAP2XI-4 fue capaz de unirse a un motivo de ADN utilizando ensayos de retardo en gel. La proteína TgAP2XI-4 se localiza en el núcleo del parásito durante todo el ciclo de vida del taquizoíto in vitro, y la expresión máxima se produce después de la citocinesis. 

Encontramos que el nivel de transcripción de TgAP2XI-4 era mayor en los quistes de bradizoíto aislados de cerebros de ratones infectados crónicamente que en los taquizoítos de rápida replicación. 

Una desactivación del gen TgAP2XI-4 en las cepas virulentas de tipo I y avirulentas de T. gondii de tipo II revela su papel en la modulación de la expresión y la actividad promotora de genes implicados en la conversión en etapa de los taquizoítos de rápida replicación en bradizoítos formadores de quiste inactivo. 

TgAP2XI-4 entonces es un factor nuclear novedoso que regula la expresión del gen bradizoíto durante la diferenciación del parásito y la formación de quistes.

Fuente Bibliografica:

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23240624/

http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1657-95502011000200012